圈門 (Gating)：在流式散點圖 / 直方圖中劃定區(qū)域，篩選目標(biāo)細(xì)胞群，排除碎片、死細(xì)胞、粘連細(xì)胞、雜質(zhì)。常用視圖：FSC（前向散射，細(xì)胞大小）、SSC（側(cè)向散射，細(xì)胞顆粒度 / 復(fù)雜度）、熒光通道。

通用標(biāo)準(zhǔn)圈門流程（通用所有細(xì)胞，必按順序）

1. 第一步：FSC-A vs SSC-A → 圈總細(xì)胞群（去除碎片 / 雜質(zhì)）

• FSC：細(xì)胞體積越大，信號越強(qiáng)；

• SSC：胞內(nèi)顆粒、細(xì)胞器越多，信號越強(qiáng)（巨噬細(xì)胞 SSC 偏高，神經(jīng)元中等）。

• 操作：圈出集中的主細(xì)胞團(tuán)，左側(cè) / 下方零散小點為細(xì)胞碎片、死細(xì)胞、灰塵，直接排除。

2. 第二步：FSC-A vs FSC-H → 圈單細(xì)胞（排除粘連體 / 團(tuán)塊）

• 細(xì)胞粘連、雙細(xì)胞 / 多細(xì)胞團(tuán)，會在對角線右上方形成散點；

• 只圈對角線上的單細(xì)胞群體，剔除粘連細(xì)胞，避免結(jié)果假性偏高。

3. 第三步：死活細(xì)胞圈門（推薦優(yōu)先做）

1. 染料染色（PI、7-AAD、DAPI）

   死細(xì)胞膜破損，染料入胞發(fā)熒光；活細(xì)胞無熒光。直接圈陰性群 = 活細(xì)胞。

2. 無死活染料：結(jié)合 FSC/SSC 輔助

   死細(xì)胞通常 FSC 降低、SSC 升高，從第一步細(xì)胞群里剔除。

4. 第四步：熒光標(biāo)記圈門（目標(biāo)亞群 / 蛋白）

• 分界線左側(cè)：陰性表達(dá)；右側(cè)：陽性表達(dá)。

• 原則：對照管優(yōu)先，切勿憑肉眼主觀劃線。

髓系和淋系細(xì)胞如何流式圈門？可以參考如下文獻(xiàn)。

論文信息：

論文題目：Protein kinase C delta regulates mononuclear phagocytes and hinders response to immunotherapy in cancer

期刊名稱：Science Advances

時間期卷：Vol 7, Issue 51(2023)

在線時間：2023年12月22日

DOI: 10.1126/sciadv.add3231

產(chǎn)品信息：

貨號：CP-005-005

規(guī)格：5ml+5ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱：Clodronate Liposomes&Control Liposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體套裝

辦事處：靶點科技