在病理?xiàng)l件下，組織巨噬細(xì)胞（如中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的小膠質(zhì)細(xì)胞）的復(fù)雜激活過(guò)程中，用經(jīng)典淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子——干擾素-γ（IFN-γ）進(jìn)行預(yù)致敏（priming）至關(guān)重要。根據(jù)當(dāng)前的生物學(xué)概念，預(yù)致敏使得巨噬細(xì)胞在遇到繼發(fā)性炎癥刺激（如細(xì)菌成分）時(shí)，能夠產(chǎn)生過(guò)度的免疫反應(yīng)。在此，我們證明，單用IFN-γ預(yù)致敏本身即可誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞增殖和適度激活，包括誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的上調(diào)。重要的是，伴隨產(chǎn)生的適量一氧化氮（NO）足以干擾快速神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)振蕩（30–70 Hz），而這種振蕩是感知、注意力和記憶等高級(jí)腦功能的基礎(chǔ)。這一機(jī)制可能有助于解釋慢性腦部疾病（如多發(fā)性硬化和阿爾茨海默病）中的早期認(rèn)知障礙。

小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的常駐巨噬細(xì)胞，在大多數(shù)腦部疾病中會(huì)被激活，例如中風(fēng)、細(xì)菌性腦膜腦炎、多發(fā)性硬化和阿爾茨海默病。小膠質(zhì)細(xì)胞的激活過(guò)程復(fù)雜，其特征包括形態(tài)改變、抗原呈遞、細(xì)胞因子和自由基釋放，以及遷移和吞噬作用的變化；其后果范圍從神經(jīng)保護(hù)到神經(jīng)毒性不等。然而，不同激活表型對(duì)神經(jīng)元功能的影響在很大程度上尚不清楚。

II型干擾素（IFN-γ）是一種可溶性細(xì)胞因子，主要由1型輔助T（Th1）細(xì)胞、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞釋放。值得注意的是，在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病和動(dòng)物模型中，包括中風(fēng)、多發(fā)性硬化和阿爾茨海默病，均有T細(xì)胞浸潤(rùn)和/或IFN-γ升高的報(bào)道。IFN-γ參與小膠質(zhì)細(xì)胞的預(yù)致敏（priming），這與多種細(xì)胞適應(yīng)性改變相關(guān)，包括形態(tài)變化、受體上調(diào)和促炎細(xì)胞因子水平升高。值得注意的是，預(yù)致敏通常被認(rèn)為能使小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)繼發(fā)性（且原本為閾下）炎癥刺激產(chǎn)生過(guò)度的反應(yīng)。例如，細(xì)菌脂多糖（LPS）通過(guò)Toll樣受體4（TLR4）作用后，會(huì)觸發(fā)促炎和細(xì)胞毒性物質(zhì)的釋放，如TNF-α、IL-6和一氧化氮（NO），最終導(dǎo)致神經(jīng)元死亡。然而，IFN-γ預(yù)致敏的小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)突觸活動(dòng)和神經(jīng)信息處理的影響尚未被廣泛探索。

我們?cè)诔錾竽X組織（原位）中，即器官型海馬腦片培養(yǎng)物中，探討了這一基本問(wèn)題。腦片培養(yǎng)物具有保存完好的細(xì)胞構(gòu)筑和功能性神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)暴露期間天然缺乏來(lái)自血管的白細(xì)胞浸潤(rùn)。膽堿能伽馬振蕩（30–70 Hz）被用作興奮性錐體神經(jīng)元和抑制性中間神經(jīng)元之間精確突觸傳遞的靈敏功能性讀數(shù)。

IFN-γ受體在功能上存在于小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞，或許也存在于神經(jīng)元中。為了驗(yàn)證伽馬振蕩減慢是否由小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)，我們使用了脂質(zhì)體包裹的氯膦酸鹽（clodronate）；這種無(wú)毒的雙膦酸鹽在被巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞攝入并在細(xì)胞內(nèi)積聚后，能夠特異性誘導(dǎo)這些細(xì)胞凋亡。氯膦酸鹽處理后，未經(jīng)其他處理的腦片培養(yǎng)物中的小膠質(zhì)細(xì)胞幾乎被清除（圖6A）。殘余的小膠質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的Iba1染色，且形態(tài)上更為肥大。即使在氯膦酸鹽存在的情況下，IFN-γ仍然能夠誘導(dǎo)這些小膠質(zhì)細(xì)胞增殖。這可能反映了小膠質(zhì)細(xì)胞具有較高的自我更新能力。值得注意的是，在小膠質(zhì)細(xì)胞耗竭的腦片培養(yǎng)物中（CLOD+IFN-γ），IFN-γ無(wú)法誘導(dǎo)頻率的特異性下降（圖6A）。峰值功率和半高全寬（FWHM）仍然沒(méi)有變化。在對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，排除了脂質(zhì)體對(duì)伽馬振蕩可能產(chǎn)生的副作用。這些數(shù)據(jù)表明，在原位條件下，減慢伽馬振蕩主要由小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)，而非星形膠質(zhì)細(xì)胞。

圖6.小膠質(zhì)細(xì)胞iNOS介導(dǎo)的伽馬振蕩減慢。 腦片培養(yǎng)物分別暴露于IFN-γ（1,000 ng/mL）、氯膦酸鹽（100 µg/mL）加IFN-γ（1,000 ng/mL）（CLOD+IFN-γ）、iNOS抑制劑1400W（10 µM）或IFN-γ加1400W（IFN-γ+1400W），處理時(shí)間為72小時(shí)。

論文信息：

論文題目：Priming of microglia with IFN-γ slows neuronal gamma oscillations in situ

期刊名稱：PNAS

時(shí)間期卷：116 (10) 4637-4642

DOI: 10.1073/pnas.1813562116

產(chǎn)品信息：

貨號(hào)：CP-010-010

規(guī)格：10ml+10ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱：Clodronate Liposomes&Control Liposomes

辦事處：靶點(diǎn)科技

Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體清除脾臟邊緣區(qū)巨噬細(xì)胞。荷蘭Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑ClodronateLiposomes見(jiàn)刊于PNAS：干擾素?γ預(yù)激活小膠質(zhì)細(xì)胞可減慢原位神經(jīng)元γ振蕩。

Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑Clodronate Liposomes氯膦酸二鈉脂質(zhì)體清除巨噬細(xì)胞的材料和方法：

In vivo macrophage depletion

Slice Cultures and Exposures.

Wistar rats (Charles River Laboratories) were handled in accordance with the European directive 2010/63/EU and with consent of the animal welfare officers at University of Heidelberg (licenses, T46/14 and T96/15). Hippocampal slice cultures were prepared from 9- to 10-d-old pups in sterile conditions and maintained on Biopore membranes at the interface between serum-containing culture medium (4 mM glucose) and humidified normal atmosphere enriched with 5% (vol/vol) CO2 (36.5 °C) . Cell culture materials were certified free of endotoxin and IFN-γ. Chemical depletion of microglia was achieved with liposome-encapsulated clodronate (Liposoma B.V.) . Exposures to recombinant IFN-γ (PeproTech), 1400W (Sigma-Aldrich), and LPS (Enzo Life Sciences) were done in the dark.

巨噬細(xì)胞清除材料和方法文獻(xiàn)截圖：